Ligatsiyani o'zgartirish qancha turadi?
Ligatsiyani o'zgartirish qancha turadi?

Video: Ligatsiyani o'zgartirish qancha turadi?

Video: Ligatsiyani o'zgartirish qancha turadi?
Video: Одуванчик / The Dandelion. Фильм. StarMedia. Фильмы о Любви. Мелодрама 2024, Noyabr
Anonim

Transformatsiya . 1-5 µl gacha qo'shing bog'lash uchun vakolatli hujayralarga aralashmasi transformatsiya . Kengaytirilgan bog'lash PEG bilan birga tushishga olib keladi transformatsiya samaradorlik (Tezkor Ligatsiya To'plam). Katta konstruksiyalar (>10,000 bp) uchun elektroporatsiya tavsiya etiladi.

Transformatsiya uchun qancha ligatsiya mahsuloti kerak?

Transformatsiya . 1-5 µl gacha qo'shing bog'lash uchun vakolatli hujayralarga aralashmasi transformatsiya . Kengaytirilgan bog'lash PEG bilan birga tushishga olib keladi transformatsiya samaradorlik (Tezkor Ligatsiya To'plam). Katta konstruksiyalar (>10,000 bp) uchun elektroporatsiya tavsiya etiladi.

Keyinchalik savol tug'iladi, ligatsiya va transformatsiya nima? Odatiy klonlash tajribasida tadqiqotchilar avval DNKning bir qismini, masalan, genni plazmid deb ataladigan DNKning dumaloq qismiga joylashtiradilar. Bu bosqichda cheklovchi fermentlar va DNK ligaza ishlatiladi va a deyiladi bog'lash . keyin a bog'lash , keyingi qadam deb ataladigan jarayonda DNKni bakteriyalarga o'tkazishdir transformatsiya.

Keyinchalik, ligatsiya uchun qancha DNK kerakligi haqida savol tug'ilishi mumkin.

Samarali bo'lishi uchun vektor + insertning umumiy konsentratsiyasi 1-10 Lg/ml orasida bo'lishi kerak bog'lash . Vektor: 1:1 va 1:10 oralig'idagi molyar nisbatlarni kiritish tavsiya etiladi (odatda 1:3). Agar o'zingizning ishonchingiz komil bo'lmasa DNK konsentratsiyalar, turli nisbatlarda bir nechta ligatsiyalarni bajaring.

Ligatsiya reaktsiyasini qancha vaqt saqlashingiz mumkin?

Ligasiyalar mumkin xona haroratida yoki salqinroqda (12-16 ° C deb o'ylang) bir kechada yoki hatto bir necha kun davomida bajaring; Agar Siz juda bandmiz. Siz.. qila olasiz; siz … mumkin shuningdek ligatsiyani saqlang muzlatgichga qo'ying va uni xona haroratida bog'lashni davom ettirish uchun keyinroq oling uzoq kerak bo'lganda.

Tavsiya: