PCR mahsulotini tozalashdan maqsad nima?
PCR mahsulotini tozalashdan maqsad nima?

Video: PCR mahsulotini tozalashdan maqsad nima?

Video: PCR mahsulotini tozalashdan maqsad nima?
Video: Milliard 18-soni | Makro bilan samarali ishlash sirlari | 2024, Noyabr
Anonim

Tozalash a dan DNK PCR reaktsiya odatda quyi oqim uchun zarur bo'lib, fermentlar, nukleotidlar, primerlar va bufer komponentlarini olib tashlashni osonlashtiradi. An'anaga ko'ra, bu fenol xloroform ekstraktsiyasi, so'ngra etanol cho'kmasi kabi organik ekstraksiya usullari yordamida amalga oshirildi.

Shuningdek, savol tug'iladi, nima uchun PCR mahsulotlarini tozalash kerak?

Sen qilishing kerak PCR mahsulotlarini tozalash ligatsiyaning muvaffaqiyatini optimallashtirish uchun foydalanilmagan primerlar, nukleotidlar va fermentlardan xalos bo'lish, bu esa ketma-ketlikni saqlab turadi. mahsulot ning PCR . Kimga tozalash the PCR mahsulotlari , o'lchamni istisno qilish xromatografiyasi qo'llaniladi.

Bundan tashqari, PCRdan keyin nima qilishim kerak? Qayta tiklashni maksimal darajada oshirish uchun saqlovchi idishni ikki marta 10 dan 20 mkl TE yoki suv bilan yuving. Final PCR reaksiya turli molekulyar biologiya ilovalari uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan bir mikrogramgacha kuchaytirilgan DNKni o'z ichiga olishi mumkin. Ushbu ilovalar qoldiq komponentlarga nisbatan ko'proq yoki kamroq sezgir bo'lishi mumkin PCR reaktsiya aralashmasi.

Shuningdek, PCR mahsulotlarini qanday tozalash kerakligi haqida savol tug'ilishi mumkin.

Qo'llaniladigan klassik usullar toza yuqoriga PCR mahsulotlari ketma-ketlikdan oldin gel elektroforezi, etanol cho'kmasi va ustun xromatografiyasini o'z ichiga oladi. Juda samarali bo'lsa-da, bu usullar bir nechta namunalarni parallel ravishda qayta ishlashda tezda noqulay bo'lib qolishi va turli darajadagi namuna yo'qotilishini ko'rsatishi mumkin.

Nima uchun DNKni tozalash kerak?

Biz toza yuqoriga DNK quyi oqimdagi ilovalarga ta'sir qilishi mumkin bo'lgan bufer tuzlari, fermentlar yoki boshqa moddalarni olib tashlash uchun suvli eritmalardan. Misollar PCR reaktsiyasini o'z ichiga oladi toza yuqoriga, toza cheklash hazm keyin yuqoriga va toza genomik yoki plazmiddan iborat DNK hujayra oqsillari / qoldiqlari bilan ifloslangan.

Tavsiya: