Spektrofotometr yordamida DNK konsentratsiyasi qanday hisoblanadi?
Spektrofotometr yordamida DNK konsentratsiyasi qanday hisoblanadi?

Video: Spektrofotometr yordamida DNK konsentratsiyasi qanday hisoblanadi?

Video: Spektrofotometr yordamida DNK konsentratsiyasi qanday hisoblanadi?
Video: Spektrofotometr yordamida polimer mahsulotlarining markalarini aniqlash! 2024, Qadam tashlamoq
Anonim

DNK kontsentratsiyasi hisoblanadi tomonidan baholangan 260 nm da absorbansni o'lchash, A ni sozlash260 loyqalikni o'lchash ( tomonidan o'lchanadi 320nm da absorbans), ko'payadi tomonidan suyultirish omili va foydalanish munosabatlar, A260 1,0 = 50µg/ml sof dsDNK.

Odamlar, shuningdek, DNKning kontsentratsiyasi va tozaligini qanday topish mumkin?

Baholash uchun DNK tozaligi , boshqa mumkin bo'lgan ifloslantiruvchi moddalarni aniqlash uchun absorbansni 230nm dan 320nm gacha o'lchang. Eng keng tarqalgan tozalikni hisoblash 260 nmdagi absorbansning 280 nmdagi o'qishga bo'lingan nisbati. Yaxshi sifatli DNK A ga ega bo'ladi260/A280 nisbati 1,7–2,0.

Xuddi shunday, yaxshi DNK konsentratsiyasi nima? A yaxshi sifat DNK namunada A bo'lishi kerak260/A280 nisbati 1,7-2,0 va A260/A230 nisbati 1,5 dan yuqori, lekin turli usullarning ushbu ifloslantiruvchi moddalarga nisbatan sezgirligi har xil bo'lganligi sababli, bu qiymatlar faqat namunangizning tozaligi uchun qo'llanma sifatida olinishi kerak.

Bu borada NanoDrop DNK konsentratsiyasini qanday hisoblaydi?

Siz 260 nmdagi absorbans qiymatini belgilangan koeffitsientga ko'paytirasiz (bu 50 uchun DNK ) va siz olasiz DNK kontsentratsiyasi . Voila. (Yaxshi, bu 50 ga ko'paytirilgan 10 mm qalinlikdagi namunaning texnik jihatdan A260; NanoDrop A260 ni xuddi standart kyuvetada bo'lgani kabi namunaning qalinligi 10 mm bo'lgandek ifodalaydi).

Nima uchun biz DNK miqdorini aniqlash uchun spektrofotometrdan foydalanishimiz kerak edi?

A spektrofotometr hisoblanadi nuklein kislotalarning o'rtacha kontsentratsiyasini aniqlay oladi DNK yoki aralashmada mavjud bo'lgan RNK, shuningdek ularning tozaligi. Foydalanish Pivo-Lambert qonuni hisoblanadi so'rilgan yorug'lik miqdorini yutuvchi molekula kontsentratsiyasiga bog'lash mumkin.

Tavsiya: